梅毒确诊通常需要进行暗视野显微镜检查、梅毒血清学试验、脑脊液检查、组织病理检查以及核酸检测等实验室检查。具体检查方式需由医生根据患者临床表现和病情阶段进行选择。
1、暗视野显微镜检查
该方法通过采集皮肤或黏膜的破损渗出液，直接在显微镜下观察梅毒螺旋体的形态和运动特征。其优势在于能够快速、直观地检测病原体，尤其适用于一期梅毒硬下疳或二期梅毒扁平湿疣等存在活动性皮损的病例，阳性结果可作为确诊依据。
2、梅毒血清学试验
分为非梅毒螺旋体试验和梅毒螺旋体特异性试验两类。前者包括快速血浆反应素环状卡片试验、甲苯胺红不加热血清试验等，用于筛查和疗效观察，后者如梅毒螺旋体颗粒凝集试验、化学发光免疫分析法等可确认感染。两者联合应用可提高诊断准确性，同时有助于区分现症感染与既往感染。
3、脑脊液检查
当怀疑神经梅毒时需进行腰椎穿刺，检测脑脊液中的白细胞计数、蛋白含量以及特异性抗体。该检查对诊断无症状神经梅毒、脑膜梅毒等中枢神经系统受累情况具有重要价值，也是判断是否需要进行驱梅治疗的重要依据。
4、组织病理检查
对于皮肤黏膜树胶肿、主动脉炎等三期梅毒病变，可通过活检观察组织内浆细胞浸润、血管内皮增生等特征性病理改变。虽然不能直接检测病原体，但结合临床表现可支持晚期梅毒诊断。
5、核酸检测
采用聚合酶链式反应技术检测病变组织或体液中的梅毒螺旋体DNA，具有高敏感性和特异性。该方法适用于血清学结果难以判读的潜伏梅毒、先天性梅毒等特殊类型，尤其当其他检测手段受限时可采用。
出现疑似梅毒症状或高危性行为暴露后，应及时到皮肤性病科就诊。医生会根据病程分期选择组合检测方案，部分检查需重复进行以排除假阴性可能。确诊后应配合规范的青霉素治疗，性伴侣需同步接受检测，治疗期间禁止性生活直至医生确认无传染性。