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抗丁型肝炎病毒IgM抗体

基本信息

  • 专科分类: 传染病检查
  • 检查分类: 肝功能检查
  • 适用性别: 男女均适用
  • 是否空腹:  空腹
  • 手术参考价: 40元
  • 科 室: 传染病检查

抗丁型肝炎病毒IgM抗体检查简介

HDV为缺陷病毒,依赖HBsAg才能复制,表现为HDV、HBV同时或重叠感染,其传播途径主要是生活接触,也可通过血液制品、输血、注射等途径传播。其实验室检查主要是检测抗原和抗体。

抗丁型肝炎病毒IgM抗体检查过程

化验取材:血液

抗丁型肝炎病毒IgM抗体的测定原理:根据免疫学中抗原,抗体之间的特异性结合的原理,利用抗人免疫球蛋白IgM捕捉待检血清中的IgM,然后加入丁型肝炎病毒抗原(HDAg)使之与血清中IgM抗HDV抗体结合,然后利用酶标记的抗-HDVIgG,它即具有与HDAg相互反应的免疫学特异性,又具有酶的催化,放大活性。当加入相应底物后,酶使底物氧化(HRP)或水解(AKP)从而使无色底物变为有色。利用颜色的深浅或A值的高低确定IgM抗HDV抗体的有无和含量的高低。

试剂:

(1)聚苯乙烯塑料板:40孔或96孔板,进口或国产。

(2)可变微量加样器:20μl,100μ1各1支。

(3)抗人IgM(μ链):鼠抗人IgM单克隆抗体或兔(羊)抗人IgM多克隆抗体。

(4)IgM抗HD阴性,阳性对照血清。

(5)HDAg:大肠杆菌表达的基因工程抗原粗提液。ELISA滴度:1∶640~1∶1280。

(6)HPR-抗HDVIgG:应用改进的过碘酸钠法标记抗HDVlgG多克隆抗体,使用稀释度1∶400~1∶4000(于10%小牛血清的PBS液中)。

(7)包被液:0.05mol/LpH9.5~9.6的碳酸盐缓冲液(Na2CO315.9g,NaHCO329.3g加水到1000ML,1∶10稀释使用)。

(8)洗液:0.01mol/LpH7.2~7.4PBST(内含8.5G/LNaCL,0.5‰Tween20)。

(9)稀释液:0.01mol/LpH7.2~7.4PBS。用于稀释和标记抗体。

(10)底物液:用前新配制。4mg邻苯二胺(OPD)+10ml基质液(pH5.0磷酸,柠檬酸缓冲液,即Na2HPO418.4g、柠檬酸5.1g溶于1000ml离子水中4℃保存备用)待溶化后加3%H2O250μl混合均匀后立即使用。

(11)终止剂:2mol/LH2SO4。

操作方法:

(1)用0.05mol/LpH9.5~9.6的碳酸盐缓冲液稀释抗人IgM单克隆抗体,包被聚苯乙烯板,每孔100μl,放4℃过夜。

(2)用PBST洗3次(中间不停留)拍干。

(3)每孔分别加入100μl1∶1000稀释后的待检血清和阴、阳性对照血清(阴性对照3孔,阳性对照2孔)放37℃1h。

(4)负压下用PBST洗板3次(方法同上)抽干(将血清和废液抽到消毒瓶内防止污染环境)。

(5)每孔加入50~100μl经适当稀释后的HDAg(2~4个ELISA单位)放45℃1h。

(6)洗3次后,每孔加入50μlHRP-抗-HDVIgG抗体(于含1%小牛血清的PBS中)放42~45℃1h。

(7)洗3次后,加50μl新鲜配制的底物液,放室温暗处显色15~30min,当阳性对照显黄色后,每孔加入1滴(25μl)2mol/LH2SO4终止反应。

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