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中和试验

基本信息

  • 专科分类： 传染病检查
  • 检查分类： 免疫检查
  • 适用性别： 男女均适用
  • 是否空腹： 　非空腹
  • 手术参考价： 30元
  • 科　室： 传染病检查

中和试验检查简介

中和试验是病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力的试验方法。

中和试验检查过程

(一)简单定性中和试验：

本法主要用于检出病料中的病毒，亦可进行初步鉴定或定型。先根据病毒易感性选定试验动物(或鸡胚、细胞培养)及接种途径。将病料研磨，并稀释成一定浓度(约100LD50～1000LD50或TCID50)。污染的病料需加抗生素(青霉素、链霉素各200～1000单位)，或用细菌滤器过滤，与已知的抗血清(适当稀释或不稀释)等量混合，并用正常血清加稀释病料作对照。混合后置37℃1h，分别接种实验动物，每组至少3只。分别隔离饲喂，观察发病和死亡情况。对照动物死亡，而中和组动物不死，即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。本法亦可用于毒素(如毒毒素)的鉴定和分型。

(二)固定血清稀释病毒法：

本法多将病毒作10倍递增稀释，分置2列试管，第一列加正常血清(对照组)，第二列加待检血清(试验组)。混合后，置37℃作用1h，将各管混合液分别接种选定的试验动物，每一稀释度用3～5只动物。接种后，逐日观察，并记录其死亡数，观察结束后，计算LD50和中和指数(表7-1、表7-2)，本法适用于大量检样的检测。

本法多用以检出待检血清中的中和抗体，对病毒而言，通常中和指数大于50者判为阳性，10～49为可疑，小于10为阴性。

(三)固定病毒稀释血清法：

本法用以测定抗病毒血清的中和价，将待检血清2倍递增稀释，加等量已知毒价的病毒液(与血清混合后，每一接种剂量含病毒100LD50)，摇匀后，置37℃作用1h，接种实验动物。

注：

[1]接种剂量0.1ml，含病毒100LD50;

[2]系指与病毒混合后的稀释度;

[3]分母为接种数，分子为保护数;

[4]PD50为半数保护，其计算法同LD50的计算。

(四)空斑减少法：

在细胞培养上进行病毒中和试验，近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度，使每0.2ml含80个～100个PFU(空斑形成单位)，与不同稀释度的待检血清等量混合，置37℃作用1h～2h，分别测定PFU，使空斑减少50%血清稀释度即为该血清的中和价。

注：

[1]血清用4倍递增稀释;

[2]空斑减少50%的血清稀释度，其计算法同LD50的计算。

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