磷酸化抗体,其实就是做磷酸化蛋白质的检测,但是对于它的一个检测问题,其实很多人都不太认识和了解,那么下面就为大家具体介绍一下,磷酸化抗体一些检测问题,只有我们对这些常识有一些科学的认识,那么在生活当中出现这种情况的时候,才不会手足无措。
做磷酸化蛋白质的检测,在裂解液中一定要加入磷酸酶抑制剂,防止其将磷酸化的蛋白质去磷酸化。关于磷酸化蛋白质的检测我想说明一下几点:
1、组织的制备一定要在冰上操作,而且速度要快。如果不是立刻配置样品最好先放在液氮里冷冻起来,哪怕两个小时之后再制备样品也有必要如此,因为磷酸化的蛋白质很容易分解。
2、组织裂解液一定要加入磷酸酶抑制剂。最好能够多加一些蛋白酶的抑制剂。防止各种酶水解蛋白质。否则,不仅磷酸化的测不出,总蛋白质也很难测出来。
3、测磷酸化蛋白质,上样量可以大一些,以加载量比较大的目标分子。
4、一抗和二抗的孵育时间都可相应延长,我曾经做过一抗孵育5小时(常温),二抗2小时的试验,结果很漂亮。
5、 推荐大家用发光剂显影法,这样灵明度要高一些。
6、压片时间可以相应的延长。
以上就是关于磷酸化抗体的介绍,希望通过这些介绍,大家对这种常识,有科学的认识,在生活当中,其实我们更多的了解这些常识,也是为了帮助我们保证健康,避免一些不利影响的发生,每个人都应该注重这些认识。